Ceremonia podpisania unijnej konstytucji odbyła się w tej samej sali, gdzie 27-ego marca 1957-ego roku podpisany ustanowiono Europejska Wspólnotę Gospodarczą, która przeksztaciła się w Unię Europejską.
W udekorowanej w kolorach Unii Europejskiej, czyli na niebiesko sali Horacjuszy i Kuriacjuszy, pod pomnikiem papieża Innocentego XI, podpisy składali kolejno, w porządku alfabetycznym według nazwy języka danego kraju, szefowie rządów i ministrowie spraw zagranicznych państw członkowskich. Każdy podpisał własnym piórem.
Podczas poprzedzającego tę ceremonię spotkania w sali rady miejskiej, premier Silvio Berluscoini zapowiedział, że Włochy jako pierwsze ratyfikują traktat i już na popołudnie zwołał posiedzenie rządu w tej sprawie. Ustępujący przewodniczący Komisji Europejskiej Romano Prodi zaapelował, by kampanii przed ratyfikacją konstytucji we wszystkich krajach nie zdominowały tematy polityki wewnętrznej.
Jego następca Jose Manuel Barroso w powściągliwym przemówieniu zauważył, że ratyfikacja przez parlamenty i obywatel krajów Unii nie jest z góry przesądzona.
W uroczystości wzięłi udział szefowie państw i rządów 25-stu pięciu państw członkowskich oraz delegacje Rumunii, Bułgarii, Turcji i Chorwacji.